Klus hovoril o Referende o vystúpení Veľkej Británie z EÚ, ktoré sa bude konať 23. júna 2016. Ohlásil ho premiér Veľkej Británie David Cameron 20. februára po jeho rokovaniach s 27 lídrami členských krajín EÚ, s ktorým vyrokoval pre krajinu nové podmienky v niektorých oblastiach členstva Veľkej Británie v EÚ.

Škóti sa už raz o získanie samostatnosti od Veľkej Británie formou referenda pokúšali, konkrétne 19. septembra 2014, kedy sa 55% zúčastnených voličov vyjadrilo proti otázke referenda: "Malo by sa Škótsko stať nezávislou krajinou?". 

Predsedkyňa škótskej národnej strany 2.júna 2015 vyhlásila: "Ak Škótsko vystúpi z EÚ, napriek tomu, že hlasovalo za členstvo v únii, mohlo by to vyvolať silný odpor" a takisto, že "Jednoducho sa domnievam, že všeobecná vlna hnevu [...] by mohla vytvoriť iniciatívu pre ďalšie referendum, ktoré by pokojne mohlo byť nezastaviteľné." 

V marci 2016 Sturgeon vyhlásila na straníckom zjazde v Glasgowe, že "bude stáť na čele obnovenej snahy za dosiahnutie škótskej nezávislosti tento rok v lete". Zaviazala sa vytvoriť z 45%, ktorí hlasovali za vystúpenie Škótska z Veľkej Británie v roku 2014 "silnejšiu a pozitívnejšiu väčšinu".